超高效液相色譜法測定茶葉中的兒茶素

　　

　　崔利輝 '.胡 娜 2，李璐琦

　　

　?。?.楊凌職業技術學院，陜西楊凌 712100;2.銅川市食品藥品檢驗檢測中心，陜西銅川727000;

　　

　　3.西北農林科技大學 生命科學大型儀器共享平臺，陜西楊凌 712100）

　　

　　基金項目：2020年楊凌職業技術學院校內基金項目'‘食品中多種抗氧化劑的快速檢測研究"（ZK20-61）。 作者簡介：崔利輝（1987—）,男，漢族，陜西楊凌人，碩士，助教。研究方向：食品質量安全檢測。

　　

　　摘 要：建立超高效液相色譜法測定茶葉中7種兒茶素類茶多酚，通過調整流動相乙<-0.1%甲酸溶液梯度，優化了 分離度，進行了加標回收試驗，結果表明，在10 - 100 ug/mL范圍內，7種兒茶素的峰面積呈現良好的線性關系，相關 系數不低于0. 999,檢出限為6.1 ~ 97.8 mg/kg,加標回收率93. 1 ~ 96.8%,相對標準偏差在1. 7% ~ 3.3%。該方法具有 分析時間短，回收率、精密度高的優點。

　　

　　關鍵詞∶超高效液相色譜;兒茶素;茶葉

　　

　　茶葉中富含多種營養成分『氣有效成分的含量和種類 對茶葉的品質至關重要。茶葉中主要的抗氧化活性成分為 茶多酚伊勺，約占茶葉干重的20%?30%。除此之外，茶 多酚還具有抗氧化、抗癌、抑菌、降壓和降脂團等保健功 效。茶多酚主要包括黃酮類、黃酮醇、兒茶素類、黃青素 類、酚酸類等物質，其中兒茶素類含量最高，占茶多酚的 60%?80%。兒茶素回包括兒茶素、表兒茶素、表沒食子 兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、 沒食子酸和咖啡因等。

　　

　　茶多酚中兒茶素類化合物的檢測方法多為液相色譜法， 如GB/T 8313—2018,高效液相色檢測方法分析時間較長， 試劑消耗量較大。本研究在此基礎上，利用超高效液相色譜 法建立了同時測定7種兒茶素茶多酚定量方法，方法分析速 度快，操作簡單，可用于茶葉中兒茶素類的測定。

　　

　　1材料與方法

　　

　　1.1儀器與設備

　　

　　LC30A超高效液相色譜儀（日本島津公司）、MS3渦旋 震蕩器（德國IKA公司）、Allegra64R低溫高速離心機（美 國貝克曼公司）、ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）。

　　

　　1.2材料與試剤

　　

　　乙睛、甲醇（HPLC級，美國天地），甲酸（HPLC級， 阿拉?。?，水（實驗室自制超純水）。對照品：沒食子酸、表 沒食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶 素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯（純度>98%，北京壇 墨質檢）

　　

　　1.3實驗方法

　　

　　1.3.1標準溶液的制備

　　

　　混合標準溶液：準確稱取各標準物50 mg,混合后用甲 醇溶解稀釋定容至50 mL,配制成濃度為l.OOmg/mL的混 合標準儲備液；分別取1 .OmL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL 和10.0 mL儲備液用甲醇稀釋定容至100 mL,配制成濃度 為 10.0 ng/mL> 20.0 ng/mL、50.0 p.g/mL> 80.00 ng/mL 和 100.0 ng/mL系列混合標準工作液。

　　

　　1.3.2樣品處理

　　

　　稱取約0.2 g（0.000 1 g）茶葉樣品于10 mL離心管中，加 入5 mL 70%甲醇，40 °C下超聲提取30 min（每間隔10 min 渦旋1 min） , 8 000 r/min離心5 min,重復提取1次，合并 兩次溶液于10 mL容量瓶，混勻后吸取l.OOmL用水1 ： 1 稀釋后過0.22 gm尼龍濾膜，液相色譜測定。

　　

　　1.4色譜條件

　　

　　色譜柱：Shim-pack XR-ODS HI（2 mm><75 mm, 1.6 pm）； 流速：0.5 mL/min；進樣量5 gL,柱溫40 °C；流動相A： 0.1%甲酸乙臘溶液，流動相B： 0.1%甲酸水溶液；洗脫程序 （A） : 0 ~ 1 min, 5% 升至 95%, 4.5 min 維持 95%； 7.0 min 降至70%維持至8 min；檢測波長：280 nm；檢測器釆集頻 率：100 ms；外標法定量。

　　

　　2結果與分析

　　

　　2.1洗脫程序優化

　　

　　本文釆用的超高效液相色譜法測定茶葉中兒茶素類和咖 啡堿，色譜峰較窄，為獲得較高的重復性，設定的紫外檢測 器檢測頻率為100 ms,進樣量5 hL,以保證的每個峰的釆 集點數多于20個，且峰較窄，更有利于分離；乙臘和甲醇 相比較，乙睛能有效的降低柱壓，得到更窄的色譜峰，響應 強度更高，有利于提升檢測靈敏度，能較好的分離7種化合 物，分析時間小于8 mm,色譜圖如圖1所示。

　　

　　2.2標準曲線及定量限

　　

　　按照確定的樣品預處理方法和液相檢測條件，依次測 定濃度 10.0 mg/L> 20.0 mg/L> 50.0 mg/L、80.00 mg/L 和 100.0 mg/L,混合標準系列工作溶液，得到線性回歸方程， 線性關系良好。以20 mg/L濃度的混標標準品溶液進行液相 分析，以各目標峰的信噪比（SIN 2 3）分別確認7種兒茶素 的檢出限，如表1表示。

　　

　　2.3準確度和精密度

　　

　　選擇樣品測定6次，計算目標物含量后，于0.2 g樣品 中加入0.2 mL 100 mg/mL,按確定的方法進行處理(”=6), 計算加標回收率和精密度，見表2。

　　

　　3結論本研究基于超高效液相色譜法建立了一種處理簡單、快 速、準確定量分析茶葉中沒食子酸、表沒食子兒茶素、兒茶 素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒 茶素沒食子酸酯7種茶多酚方法，與GB/T 8313—2018相比, 優化了色譜條件，提高了檢測靈敏度，縮短了檢測分析時間。

　　

　　結果顯示，本方法可以在8 min內完成7種茶多酚的檢 測，具有良好的準確度和精密度，在10?100mg/L范圍內， 信號響應值呈現良好的線性關系,線性相關系數大于0.999, 檢出限為6.1?97.8 mg/kg,加標回收率93.1%?96.8%, 相對標準偏差在1.7?3.3%o

　　

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