PCR法鑒別市售牛肉及其制品中的摻假情況分析

2019-09-30 16:27:30 來源: 食品安全導刊

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  牛肉及其制品因其營養豐富,深受人們的喜愛。不法商販用相對廉價的馬肉、豬肉、鴨肉等肉類原料,通過各種手段加工,冒充牛肉、羊肉制品進行銷售以謀取不當利益,從而嚴重侵犯消費者的合法權益。聚合酶鏈式反應( polymerase chain reaction,PCR) 是一種使特定核酸片段在體外大量復制的技術,利用這一技術,可以讓目標物種的特異DNA片段進行大量復制而進行檢測,以鑒別肉制品中是否摻入其他物種。相比于其他檢測手段,PCR檢測技術具有特異性好,靈敏度高等優勢,可以準確地為政府監管提供有利證據。本文對在各大菜市場和超市購買的牛肉及其制品中牛、豬、鴨成分進行了檢測,并根據檢測經驗對鮮牛肉的清洗樣和血水進行取樣檢測,對檢測結果進行了結果分析和總結,為摻假牛肉檢測技術提供理論和技術支撐,提高檢測人員對肉類檢測技術的檢測和分析能力。
  
  材料與方法
  
  材料與試劑
  
  鮮牛肉,牛肉制品均購自于南京市各大菜市場和超市。
  
  DNA提取試劑盒TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver 5.0 、Real Time PCR Bovine DNA Detection Kit、Real Time PCR Procine DNA Detection Kit、TaKaRa Taq(5U/uL)、10×PCR Buffer(Mg2+ plus)、dNTP Mixture(各2.5 mM)、PCR體系預混液Premix Ex TaqTM(Probe qPCR)寶生物工程(大連)有限公司。
  
  儀器和設備
  
  實時熒光定量PCR儀(96孔板):美國賽默飛;ST 16R高速冷凍離心機:美國賽默飛;EPS 300電泳儀 Tanon;Universal GenoSens1800凝膠成像儀:上海勤翔;ABI 2720普通PCR儀。
  
  DNA提取
  
  對每個鮮牛肉樣品按照不同的部位和步驟取樣,分別取原樣,清洗樣(盡量取肉的中心位置,用自來水反復清洗),血水(浸出到包裝袋里的血水),對采得的樣品進行DNA提取,其中血水的DNA提取稱樣量為100mg。對牛肉卷等牛肉加工樣品直接取原樣進行DNA提取。DNA的提取均采用試劑盒的說明書方法步驟進行。
  
  熒光定量PCR檢測 
  
  牛和豬的PCR反應體系均為:預混液20 μL,包括DNA模板0.8μL,2×Premix for Bovine( Procine)10 μL,Primer Mix for Bovine( Procine)0.8 μL,Probe Mix for Bovine( Procine)0.8μL,加ddH2O補足20μL。PCR反應條件為:95℃預變性10 s;PCR反應:95 ℃ 5 s,60 ℃ 25 s,進行40個循環。根據擴增曲線Ct值≤35.0視為檢出?;蜇i成分。
  
  鴨的PCR反應體系為:預混液20 μL,包括DNA模板1.6 uL,Premix Ex TaqTM(Probe qPCR)10 uL,上下游引物各0.4 uL,Probe 0.8 uL,加ddH2O補足20uL。反應條件為:95℃預變性30 s;PCR反應:95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,進行40個循環。根據擴增曲線Ct值≤35視為檢出鴨成分。
  
  結果與分析
  
  對各大超市和菜市場購買的50批次鮮牛肉及牛肉制品等樣品進行牛、豬、鴨成分檢測,檢測結果如圖1。
  
  由圖1可以看出,純牛肉為36例,占總數的72%。發現一例牛肉摻鴨肉,摻假肉占2%。牛肉中摻有豬血的樣品占6%,牛血不易采集,價格貴,且牛血味道難聞,不法商販為了增加牛肉的重量而使用豬血浸泡牛肉,以獲取更高的利潤。發現假肉為10例,且均為豬肉造假牛肉。其中純豬肉為3例,占總數的6%,豬肉之所以能華麗變身為“牛肉”,其中起最大作用的并不是“硼砂”,而是豬血,將事先準備好的豬血、豆粉、糖、鹽等混入已經絞碎成片的豬肉中攪拌,同時加入硼砂,經過均勻攪拌后,正規的豬肉就被加工成了外觀顏色鮮紅的“牛肉”;豬肉中摻牛
  
  圖1 牛肉摻假種類及數量結果
  
  血數量為7例,占14%,用牛血浸泡豬肉,從鮮肉外觀上聞和看都會造成是牛肉的假象。
  
  結論
  
  本文對樣品的原樣、清洗樣(用自來水清洗)、血水進行取樣并提取DNA,檢測牛、豬、鴨三種成分,發現摻假情況多種多樣,有牛肉摻鴨肉,牛肉摻豬血,純豬肉,豬肉摻牛肉等摻假及造假情況,其中摻假率為2%,造假率為20%。在檢測過程中對樣品進行清洗,可以洗掉浸泡在肉組織中的血水,只對肉組織進行取樣分析,防止不法商販為了造假牛肉而用豬肉浸泡牛血冒充牛肉,對血水進行提取DNA檢測也是此目的。本文只是對日常過程中遇到的摻假案例進行了分析總結,在以后的工作中應多方面關注肉類摻假信息,提高物種鑒定技術,同時在檢測過程中,對樣品的取樣應觀察肉樣是否是整塊肉。如果不是整塊肉,應均勻取樣,且取樣品的紅肉部分;如果肉樣是整塊肉,則應取肉樣的中間部位,并進行多次清洗,把血水洗干凈,減少因血液浸泡而引起的誤判。
  
  馬慧娟  江蘇省理化測試中心
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