鼻炎靈丸中黃連的質量控制研究
儀器與試藥 日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀,鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品(均由中國食品藥品檢定研究院提供)批號依次為:110732-201108、110713-201212;規格:供含量測定用(含量分別以86.2%、86.7%計)。乙腈為色譜純,水為純化水,其它試劑均為分析純。
色譜條件 色譜柱:島津 Inertsil ODS C18(4.6×250mm,5µm);流動相:乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(用磷酸調節至pH3.0)(30:70);流速:0.8ml/min;柱溫:25℃;檢測波長:348nm;理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000。
對照品溶液的制備:取鹽酸巴馬汀對照品和鹽酸小檗堿對照品適量,精密稱定,加60%乙醇溶液制成每lml分別含鹽酸巴馬汀與鹽酸小檗堿各10µg的混合溶液,即得。
供試品溶液的制備:取重量差異項下的本品內容物,混勻,取約1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入鹽酸-甲醇(1→100)混合溶液50ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30分鐘,放冷,再稱定重量,用鹽酸-甲醇(1→100)混合溶液補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得。
系統適用性試驗 測定波長的選擇:取對照品溶液,經TU-1900型紫外可見分光光度計在190.0nm~400.0nm范圍內分別測定,鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿在192.80、193.00nm波長處,最大吸收,考慮到高效液相色譜儀紫外檢測器在此處吸收較弱,則選擇兩者共有的波長吸收處,同時參照《中國藥典》2010年版一部黃連項下含量測定的檢測波長,故選擇348nm為本實驗的測定波長。
柱的選擇及柱效的考察:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以島津Inertsil ODS C18(4.6×250mm,5µm),流動相:乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(用磷酸調節至pH3.0)(30:70),流速:0.8ml/min,柱溫:25℃,檢測波長:348nm。
采用島津Inertsil ODS C18(4.6×250mm,5µm)的柱測定,鹽酸巴馬汀,鹽酸小檗堿對照品及供試品理論板數均較高。根據檢測結果,同時參照《中國藥典》2010年版一部黃連及成藥含量測定項下的含量測定方法,確定本品理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000。
陰性對照試驗:為進一步考察試驗的合理性,取不含黃連的陰性對照樣品。依正文所述方法進行測定。結果,陰性樣品色譜在與鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品色譜峰相應的保留時間附近無干擾峰檢出,證明本方法合理可行。
精密度試驗:精密吸取對照品溶液10µl,注入液相色譜儀,重復6次,測定其色譜峰面積值,鹽酸巴馬汀RSD=0.1% 鹽酸小檗堿RSD=0.2%結果表明所用儀器具良好的精密性。
重復性試驗:取同一供試品,依正文方法獨立測定6份, 鹽酸巴馬汀平均值0.49(mg/g)RSD=0.3% 鹽酸小檗堿平均值0.49(mg/g)RSD=0.4%結果表明本法具良好的重復性。
穩定性試驗:取供試品溶液,按正文色譜條件測定,結果鹽酸巴馬汀RSD=0.3% 鹽酸小檗堿RSD=0.5%結果表明48小時內供試品溶液中鹽酸巴馬汀、鹽酸小糪堿的含量基本穩定。
標準曲線制備 分別取鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品約10mg,精密稱定,分別置100ml量瓶中,用60%乙醇適量溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得貯備液。分別精密吸取鹽酸巴馬汀、鹽酸小糪堿貯備液0.5ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.5ml置10ml量瓶中,再用60%乙醇稀釋至刻度,搖勻。精密吸取上述5種溶液各10µl注入高效液相色譜儀測定,以對照品濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,計算回歸方程,鹽酸巴馬汀回歸方程y=61522x-4593.6 (r=1) 鹽酸小檗堿回歸方程y=59518x-2859.3 (r=1)結果表明鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿分別在0.044~0.131µg范圍內,呈線性關系,符合外標法定量測定的要求。
回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品(批號:131208,鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量分別為0.4897mg、0.4890mg)九份,每三份分別精密加入鹽酸巴馬汀對照品溶液(87.2344µg/ml)及鹽酸小檗堿對照品溶液(88.4340µg/ml)2.3ml、2.9ml、3.5ml,依法操作及測定,計算回收率,測得鹽酸巴馬汀的平均回收率為98.6%,RSD=1.1%;鹽酸小檗堿的平均回收率為98.7%,RSD=0.7%,結果表明本法回收率較好,準確度較高。
樣品測定結果及限度 依正文方法測定三批樣品,鹽酸巴馬汀含量測定結果平均為0.49 mg/g,鹽酸小檗堿含量測定結果平均為0.50 mg/g。
參照《中國藥典》2010年版一部黃連藥材中鹽酸小檗堿的含量限度,根據三批樣品的含量測定結果,暫定本品每克含鹽酸小檗堿(C20H17NO4•HCl),不得少于0.42mg;本品每克含鹽酸巴馬汀(C21H22ClNO4)不得少于0.40mg
為保證鼻炎靈丸中的黃連的質量控制,本方法使用兩種專屬性強的有效成份進行對照測定,即能保證黃連的專屬性鑒別,也能有效的控制黃連含量。
孟軍 戚穎欣
通化市食品藥品檢驗所 吉林工程技術師范學院
作者簡介:孟軍 吉林省通化人,職稱:副主任藥師,本科,研究方向:食品藥品檢驗分析。單位:通化市食品藥品檢驗所

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