經過查閱中外文獻發現，現如今提取花青素的原料一般為胡柚、漿果等水果類食物，而較少采用常見的蔬菜紫皮洋蔥來進行實驗。此外，目前所使用的常規提取方法仍較為傳統，而這些方法普遍存在著一些弊端。反之，新型的微波輔助提取法(MAE)具有提取充分、得率高、耗時短等優點，從而漸漸受到廣泛重視，其原理為在微波輻射下，樣品中的水分等極性物質吸收微波能量，大量產熱，使得細胞內溫度升高迅速，當液態水汽化時產生巨大的壓力將細胞膜和細胞壁沖破，從而有利于胞內物質釋放到提取液中并充分溶解。

　　綜合上述情況，本實驗選取紫皮洋蔥作為原料，使用MAE進行輔助提取，并采用析因設計法來確定最為優化的提取條件，同時嘗試對高效液相色譜(HPLC)的洗脫梯度進行優化，為后續對紫皮洋蔥中花青素的定性和定量實驗做好鋪墊。

　　實驗材料和方法 樣品準備 從超市購買2公斤紫皮洋蔥，洗凈后切成小塊(5mmX5mmX2mm)裝入密封袋中，暫時無需使用的樣品可儲存于冰箱內的冷凍層中(-18℃)。樣品前處理 用水、乙醇和甲酸(體積比為94:5:1)混合的提取液對切好的樣品(洋蔥皮：洋蔥球莖=1:4)進行提取。

　　MEA實驗方法(1)經查閱文獻，選取三個參數作為本實驗中的變量，即微波功率(w，瓦)，提取時間(min，分鐘)和固液比(樣品體積：提取液體積);

　　(2)變量選擇好后，先預估本實驗中三個參數的范圍，然后進行預實驗，以確定微波儀器所能承受的功率和實驗容器所能承載的樣品體積;(3)考慮到參數彼此間的相互作用，為確定MAE的最優提取條件，對實驗中的三個變量進行析因設計，并進行8組實驗。HPLC檢測方法 紫皮洋蔥中含有多種花青素的衍生物，而這些成分在HPLC中的保留值不同，因此在本實驗中應用反相HPLC結合梯度洗脫法，來對紫皮洋蔥中的多種花青素衍生物進行分離，并對洗脫梯度進行優化，最后進行重復性和再現性實驗。

　　色譜條件 色譜柱：C-18(2.5μm，2.0mmX100mm)。流動相：A為5%的甲酸水溶液;B為5%的甲醇水溶液。檢測波長：520nm。流速：0.2ml/min。柱溫：30℃。經0.45μm的濾膜過濾后，進樣量30μL進行色譜分析。

　　實驗結果 通過MAE預實驗，確定微波儀器的最大功率應<300w，實驗容器所能承載的樣品體積應<10mL，以防止實驗樣品的外溢和降解。通過完全析因設計的8組實驗，可以從提取液的顏色中推斷出較合理的參數組合，然后再繪制等值線圖對實驗結果進行進一步的分析，確定MAE的最優條件為微波功率50w，固液比1:40，提取時間3分鐘。通過對不同洗脫梯度下色譜圖的分析對比，權衡其出峰時間和峰型效果，對洗脫梯度進行優化(見表1)，其中包含了前10分鐘的平衡時間和后20分鐘的沖洗時間。

　　表1 花青素的優化洗脫梯度

　　選擇優化梯度下的一個洗脫較快(15-16分鐘之間)且形狀良好的峰，進行三次平行實驗，對每一次的該峰面積進行計算，結果其相對標準偏差(RSD)為2.38%，表明重復性和再現性良好。

　　呂冠薇 長春醫學高等?？茖W校