免疫分析法測定食品中四環素類藥物殘留
李依孜，韓宣怡
（河北農業大學理工學院，河北滄州 061000）
摘 要：四環素類藥物在動物疾病的防治中有重要的作用，但隨著四環素類藥物的廣泛使用，出現了濫用、用藥不規范等情況，使食品及環境中產生了大量藥物殘留，食用含四環素類藥物殘留的食物會對人體健康產生危害。本文對免疫分析法測定食品中四環素類藥物殘留進行了研究，主要討論現今仍在廣泛使用的檢測方法，并對其性質進行分析，最后對四環素類藥物檢測的發展趨勢進行展望。（河北農業大學理工學院，河北滄州 061000）
關鍵詞：四環素類藥物；藥物殘留；免疫分析法
隨著畜牧業的發展，獸藥殘留問題得到了越來越多的關注。其中四環素類藥物價格便宜、抗菌效果好，常用于預防或治療畜禽等的腸道感染[1]。合理的使用藥物可以使畜禽的患病概率和飼養成本降低。但在用藥過程中，部分養殖人員相關知識儲備不足，過量使用藥物，或未經過一定周期使藥物完全排出，使生產的食品中存留藥物或者其代謝產物。
四環素類藥物的普遍使用給養殖者提供了很多的便利，但也可能會產生獸藥殘留問題。經過長期的攝入，在體內不斷蓄積。過多的抗菌藥物作用于人體甚至有致癌、致畸、致突變的危害，尤其對發育不完全的嬰幼兒有極大的危害。四環素類藥物遍布體內各處，極易在牙齒和身體骨骼處沉積，與鈣元素發生反應，生成難溶物質，不利于青少年的發育，還會導致牙齒發生不可逆的染色，且可對肝臟造成損害。
1 免疫分析法測定
目前，測定動物性食品中的四環素類藥物有很多種不同的方法，如微生物檢測法、免疫分析法、儀器分析法等。其中儀器分析法雖然具有較高的準確度，但儀器價格昂貴，對操作人員要求較高，并且檢測時間長，因此其應用受到了限制。微生物法樣品前處理以及操作步驟簡單，但需要二次確證，常用于定性分析。而免疫分析法是以抗原抗體的結合反應作為基礎的一種綜合性檢驗技術。這種方法具有敏感性高、特異性強的優勢，當樣品中抗菌藥物殘留量大于10 μg/kg時即可使用，廣泛應用于四環素類藥物的定性和定量分析。
1.1 酶聯免疫吸附法
ELISA法即酶聯免疫吸附法，結合了酶的催化作用和抗原抗體的特異性免疫作用，通過抗原或抗體與樣品中的物質結合，使待測物質與酶連接，底物和酶發生反應后會產生顏色反應，能通過發生顏色變化的時間來計算樣品中抗菌性藥物的含量[2]。用此方法測定樣品中的青霉素、頭孢類等藥物殘留時還需要對樣品進行處理才能實現檢驗。該檢驗方法有準確度好、檢測速度快、靈敏度高且適用于大批量樣品檢驗的優點，可以很好的進行四環素類抗菌藥物的檢驗。
陳妙瑞[3]對豬肉、豬肝、牛肉、牛肝、魚肉進行了檢驗和分析，通過ELISA法測定了其中的四環素類抗菌藥物，發現通過此方法對四環素類抗菌藥物進行檢驗，有用時短、操作容易、效率高的特點。在試驗中準備了40份樣品，從樣品的前處理到完全做完檢測僅用時4 h，并且其檢測限滿足了最高殘留量的標準，這一方法適合基層實驗室的檢測。
1.2 放射免疫法
放射免疫法（RIA）是發明時間較早的一種免疫分析技術，它的原理是利用樣品中未被標記的抗原和經過放射性同位素標記的抗原同抗體發生競爭性抑制反應，再通過檢測最終產物中放射性標記強度來計算原本的樣品中含有多少抗原。這種方法的特異性強、操作簡單，但易產生放射性污染，因而大大限制了其應用[4]。
周浩等[5]根據GB14963—2003中的要求通過RIA法對蜂蜜中殘留的四環素類抗菌藥物進行了檢測，并用液相色譜串聯質譜（LC-MS）法對試驗結果進行了驗證，發現試驗結果準確。而且經其研究證明RIA法應用時，磺胺類藥物、紅霉素、鏈霉素等抗菌藥物都對四環素類藥物的檢測無影響。
1.3 熒光免疫分析法
熒光免疫分析法（FIA）的原理是對抗原或抗體用熒光物質標記，然后使其與相應的抗體或抗原特異性結合，再通過熒光顯微鏡觀察或用紫外線進行照射，根據最終產物的熒光強度來判斷原樣品中的含量[6]。這種檢測方法可以對多種抗菌性藥物、重金屬、生物毒素等進行分析，且具有較高的靈敏度和較強的抗干擾能力。
李研東等[7]對FIA法進行了應用，在實驗中對豬肉、雞肉、魚肉、蝦肉進行了檢測，對此方法對藥物檢測的準確度、特異性、檢出限等多種性能進行了研究，分析發現FIA法可用于多種不同種藥物的同時檢測。而且在實驗中還比較了FIA法、ELISA法和LC-MS法，證明了FIA法具有很好的準確度和靈敏度。
1.4 膠體金免疫層析法
膠體金免疫層析（GICL）法綜合了膠體金標記技術和抗原抗體的特異性結合來對樣品進行檢測[8]，其原理是用膠體金納米材料作為抗體標記物，在特定的反應膜區域與抗體（或抗原）形成紫紅色的物質。它的操作簡單、直觀，可以進行定性檢測或半定量檢測。聶雯瑩等[9]通過膠體金免疫層析法對牛奶中的四環素類藥物的殘留量進行檢測。他們研制出的試紙條除檢測四環素類藥物殘留外還可以檢測β-內酰胺類藥物，有特異性強、操作簡單等特點，且其檢測時間短，僅需3～5 min，可以滿足對檢測四環素類藥物的
要求。
1.5 電化學免疫法
電化學免疫法結合了電化學技術和免疫分析技術，可以對四環素殘留進行快速檢測。它的原理是使用電化學試劑對抗原或抗體進行標記，如果樣品中含有四環素及其代謝產物時，能發生特異性結合，結合后的電化學信號不同于先前，并可以將這種變化通過儀器的放大指示器顯示。該檢測方法不僅具有電化學分析法靈敏度高的特點還有免疫分析法特異性強的特點，并且不會產生放射性污染，操作簡單。
鄭舒[10]研究了一種電化學免疫傳感器，使用這一儀器對牛奶中的四環素殘留進行檢測，其工作電極為五氧化二鈮。最后使用ELISA對這一方法進行了驗證，證明了此方法的準確性，適用于檢測四環素殘留。
2 結語
食品中殘留四環素類藥物有流動性強、不穩定的特點，危害消費者身體健康。然而，目前用于檢測食品中四環素類抗菌藥物的方法，多數存在樣品前處理復雜、不適合短時的現場篩查等缺點。隨著監管部門對獸藥濫用的問題的重視、監控體系的完善，發展可視化現場快速檢測食品中四環素類藥物殘留的方法是必然的發展趨勢。因此，在食品安全檢測中免疫分析技術將越來越受到人們的重視，為我國的食品安全檢測提供更合適的方法。
參考文獻
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[2]劉丁溪,楊杰程,周宏超,等.動物性食品中抗菌藥物殘留檢測方法研究進展[J].中國畜牧醫,2019,46(7):2183-2192.
[3]陳妙瑞.動物性食品中四環素類抗生素殘留的ELISA檢測[J].企業技術開發,2017,36(5):47-48.
[4]何金環,王一凡.TTC和ELISA法檢測純牛奶中抗菌藥物殘留比較[J].安徽農業科學,2007(9):2576-2577.
[5]周浩,李俊霞,楊紅,等.蜂蜜中四環素類抗生素的放射免疫法檢測[J].食品研究與開發,2012,33(11):160-162.
[6]闞鹿楓.用細菌抑菌實驗法快速檢測抗微生物藥物在動物組織中的殘留[J].中國獸藥雜志,2000(4):57-59.
[7]李研東,韓雪,吳雨洋,等.動物性食品中四環素類藥物殘留量子點熒光免疫技術研究[J].農產品質量安全,2017(5):83-86.
[8]宋予震,董青,邢廣旭,等.免疫分析方法在磺胺類藥物殘留檢測中的應用[J].河南農業科學,2017,46(10):8-12.
[9]聶雯瑩,唐承明,王建霞,等.牛奶中β-內酰胺類和四環素類藥物膠體金快速檢測方法的建立[J].中國畜牧獸醫,2013,40(12):70-75.
[10]鄭舒.基于五氧化二鈮的電化學免疫傳感器檢測牛奶中四環素的研究[D].長沙:湖南農業大學,2016.
作者簡介：李依孜（2001—），女，漢族，河北邢臺人，本科在讀。研究方向：食品質量與安全。
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