孔雀石綠、結晶紫是有毒的三苯甲烷類化學物，農業部將它們列為水產上的禁藥。然而由于其對魚體水霉病和魚卵的水霉病有特效，許多水產業養殖戶仍在違規使用。因此，農業部將孔雀石綠、結晶紫列為水產品檢測的重點項目。

　　本文依據農業部公告SNT 1768-2006《水產品中孔雀石綠和結晶紫及其代謝產物的快速測定方法》，采用智能化食品安全一體機進行前處理，經過固相萃取技術濃縮凈化，再用高效液相色譜儀檢測。大大減少檢測步驟和檢測時間，可用于水產品中孔雀石綠和結晶紫及其代謝產物的應急篩查和常規檢測。

　　試劑和材料

　　標準品:孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫純度大于98%，均來自中國水產科學研究院。

　　孔雀石綠、結晶紫快速檢測前處理試劑盒(北京六角體科技發展有限公司)，其中包括提提取劑、液體提取劑、固相萃取柱、洗脫劑。

　　其余試劑均為色譜純。

　　儀器和設備

　　高效液相色譜儀：配紫外-可見光可變波長檢測器;檢測波長時間程序可控。

　　智能化食品安全一體機。

　　液相色譜條件和實驗步驟

　　色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm (d.i),粒度5μm;

　　流動相：乙腈+乙酸鹽緩沖液(80+20,V/V);

　　流速：1.0mL/min;

　　柱溫：室溫;

　　進樣量：20μL。

　　檢測波長時間程序:0min～5.0 min,618nm;5.0min～12min,588nm;12min～18min,267nm;孔雀石綠的檢測波長為618nm，結晶紫的檢測波長為588nm，隱色孔雀石綠和隱色結晶紫的檢測波長為267nm。

　　魚取肉質部分，蝦去殼。取樣品5.00g于通道1攪拌杯中，再加入一瓶固體提取劑，并連接底座和固相萃取柱。將攪拌杯置入儀器。設置各項參數為：攪拌時間1：1(s)、攪拌間歇1：30(s)、攪拌次數1：5、提取劑量1：10(mL)、攪拌時間2：1(s)、攪拌間歇2：30(s)、攪拌次數2：2、提取劑量2：20(mL)、萃取時間：60(s)、氣壓檔位：8。

　　取下固相萃取柱，加入1mL洗脫劑洗脫。旋轉蒸干后，加入1mL流動相復溶，進樣分析。

　　結果與討論

　　色譜測定

　　在上述色譜條件下，孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫的保留時間約為孔雀石綠4.0min、隱色孔雀石綠13.6min、結晶紫5.4min、和隱色結晶紫14.7min。

　　繪制標準工作曲線

　　移取孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫混合標準溶液，用流動相稀釋成0、2ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標準工作溶液，用高效液相色譜儀測定，得出標準工作曲線。線性系數0.996，y=1088.2x+5843.3。

　　孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫的檢測限均為2.0μg/kg。

　　樣品檢測結果計算

　　取魚、蝦樣品，按實驗方法處理后，用色譜數據處理機或按式(1)分別計算供試樣品中的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫殘留量。

　　2

　　ω= ci …… (1)

　　5

　　ω-水產品中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫殘留量，μg/kg;

　　ci-標準曲線上查出試樣溶液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫標準工作溶液的濃度，μg/L;

　　2/5-換算常數。

　　實際檢測10個以上樣品，得出方法回收率為:85%～105%。

　　*北京市科技計劃課題：《智能化食品安全一體機的研制與應用》，課題編號Z131100006113022。